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    ELISA試劑盒抗體反應(yīng)使抗原固相化

    發(fā)布時間: 2017-10-13  點(diǎn)擊次數(shù): 1231次

    ELISA試劑盒的基本原理有三條:
    (1)抗原或抗體能以物理性地吸附于固相載體表面,可能是蛋白和聚苯乙烯表面間的疏水性部分互相吸附,并堅(jiān)持其免疫學(xué)活性;
    (2)抗原或抗體可通過共價鍵與酶銜接構(gòu)成酶聯(lián)絡(luò)物,ELISA試劑盒而此種酶聯(lián)絡(luò)物仍能堅(jiān)持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性;
    (3)酶聯(lián)絡(luò)物與相應(yīng)抗原或抗體聯(lián)絡(luò)后,可依據(jù)參與底物的顏色反應(yīng)來判定是不是有免疫反應(yīng)的存在,而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或抗體的量成正比例的,因此,可以按底物顯色的程度顯現(xiàn)試驗(yàn)成果。法是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù),現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所導(dǎo)致的盛行癥、寄生蟲病及非盛行癥等方面的免疫診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,ELISA試劑盒依據(jù)現(xiàn)已運(yùn)用的成果,認(rèn)為法具有活絡(luò)、特異、簡略、快速、安穩(wěn)及易于自動化操作等特征。不只適用于臨床標(biāo)本的檢查,而且由于一天以內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本,因此,也適合于血清盛行病學(xué)查詢。
    ELISA試劑盒因此含雜質(zhì)較多的抗原也可選用捕獲包被法,試驗(yàn)的特異性、敏感性均由此得以改進(jìn),重復(fù)性亦佳。蛋白質(zhì)與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附聯(lián)絡(luò)的,靠的是蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)上的疏水基團(tuán)與固相載體表面的疏水基團(tuán)間的效果于??蓪⒕郾揭蚁┌逑冉?jīng)紫外線照射(例如30W紫外燈,75cm照射12小時),以增加其吸附功能。例如,在檢查抗DNA抗體時,需用DNA作為包被抗原,ELISA試劑盒而廣泛的固相載體一般不能直接與核酸聯(lián)絡(luò)。換言之,包被就是抗原或抗體聯(lián)絡(luò)到固相載體表面的進(jìn)程。當(dāng)抗原決定簇存在于或鄰近于疏水區(qū)域時,抗原與固相載體的直接吸附可使抗原決定簇不能充分露出,在這種情況下,直接包被效果不佳,可以選用直接的捕獲包被法,即先將關(guān)于該抗原的特異抗體作預(yù)包被,這今后通過抗原。也可用親和素生物素體系作直接包被,即用親和素先包被載體,然后參與生物素化的DNA,這種包被方法均勻、結(jié)實(shí),已擴(kuò)展應(yīng)用于各種抗原物質(zhì)的定量測定。
     

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