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ELISA試劑盒每次提蛋白后會將樣品在短時刻內(nèi)重復2-3次WB,可是每次跑出的條帶趨勢不共同,上樣量和其他條件都沒有變,內(nèi)參根本是規(guī)整安穩(wěn)的,不知道為什么意圖條帶就是不共同?
首要內(nèi)參安穩(wěn)闡明上樣量安穩(wěn)(應該大致是一樣的),所以不存在什么上樣量不一樣的問題;呈現(xiàn)這樣的成果,問題出在每一步都有一定的可能性,比如電泳,轉(zhuǎn)膜,敷抗體,顯色等等。但據(jù)我所知,WBzui要害的仍是轉(zhuǎn)膜和敷抗體步驟,可能是你敷抗體的時分敷的不均勻。我的主張是你再認認真真,仔仔細細做幾遍,很可能重復性就做出來了。僅僅個人觀點。
ELISA試劑盒根本操作的問題我們沒必要去考慮。我認為問題的要害在于成像的進程。同一張膜,本人能夠在成像的時分,做出*不同的圖片成果。顯色液的滴加,量,以及曝光時刻,條帶色彩(要求灰色而不是黑色)。所以有圖片闡明問題。
說是內(nèi)參共同,而意圖條帶每次都不一樣,我想說原因可能是在顯影液環(huán)節(jié),簡單來說就是你的膜沒有淋潔凈,上面殘留參差不齊的T/TBS,T/TBS能稀釋顯影液,意圖條帶正本表達量就少,某一個點殘留的T/TBS略微多一點就可能導致顯影作用下降,所以主張在顯影液反響前,盡量將膜上的洗膜液淋掉(當然也不能讓膜干了,要是實驗室富裕的話,也能夠多添點顯影液,作用一樣),期望對你有協(xié)助。
可能觸及幾個原因:1,拔梳子時膠錯動,參加樣本后進入其他孔或漏出。由于內(nèi)參表達高,可能不會顯示出差異。2,參加樣本時不均勻也可能會發(fā)生差錯。3,制膠應確保均勻無氣泡,玻璃板潔凈,這樣才干確保成果共同牢靠。
ELISA試劑盒盡管用WB做出一張滿足的成果觸及多個環(huán)節(jié),但向上面你說到的內(nèi)參沒有問題,闡明各項操作根本是過關的,據(jù)我猜想很可能是zui終一步曝光呈現(xiàn)的問題,加發(fā)光液反響的時刻及曝光的時刻都會對zui終的成果發(fā)生影響, 還有一種可能你的發(fā)光液的安穩(wěn)性或許不太好,期望對你有所協(xié)助,哪里說的不對也請多指導.