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    如何選擇合適的HA標(biāo)簽抗體?

    發(fā)布時(shí)間: 2019-05-28  點(diǎn)擊次數(shù): 1327次

    HA標(biāo)簽系統(tǒng)利用一個(gè)HA (流感病du血凝素,influenza hemagglutinin epitope: YPYDVPDYA)短肽肽融合到目標(biāo)蛋白。HA標(biāo)簽可位于蛋白質(zhì)的C端或N端,該系統(tǒng)已廣泛應(yīng)用于多種細(xì)胞類(lèi)型,相應(yīng)的HA標(biāo)簽抗體也被廣泛應(yīng)用。HA標(biāo)簽抗體能特異識(shí)別C末端或N末端帶有HA標(biāo)簽(HA-tagged)的融合蛋白,也可以用于檢測(cè)和HA tag融合表達(dá)蛋白的表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)ding位,以及純化、定性或定量檢測(cè)HA tag融合表達(dá)蛋白等。

     

    我們?cè)谶x擇一個(gè)標(biāo)簽抗體時(shí),主要根據(jù)自己實(shí)驗(yàn)應(yīng)用上的需要。這里需要考慮的因素包括,HA抗體的應(yīng)用檢測(cè)類(lèi)型、HA抗體的克隆性及制備來(lái)源等。比如該HA抗體是否能用于免疫熒光IF的檢測(cè)?是否可以用于Western Bloting和免疫沉淀IP實(shí)驗(yàn)?是否需要HRP偶聯(lián)的單克隆HA標(biāo)簽抗體?還是一個(gè)兔來(lái)源的HA多抗更合適?     

     

    一般來(lái)說(shuō),應(yīng)用類(lèi)型越多,在使用過(guò)程中的選擇余地就越大,而小鼠源的單克隆抗體一般在特異性、穩(wěn)定性都要優(yōu)于多克隆抗體,而多克隆。另外,抗體的效價(jià)也是考察該抗體性?xún)r(jià)比的重要方面,也即相當(dāng)于實(shí)際應(yīng)用時(shí)的稀釋比率。一個(gè)效價(jià)高的100μl HA抗體(假如其WB檢測(cè)的稀釋比率是1:5000,終使用液相當(dāng)于500ml),要比效價(jià)低的1ml的HA抗體(假如WB檢測(cè)的稀釋比率是 1:200,終使用液相當(dāng)于200ml)性?xún)r(jià)比更高。因此在選擇抗體的時(shí)候,不但需要考慮抗體的量,還需要考慮抗體的效價(jià),即不同應(yīng)用的建議稀釋比率。
     

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