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    您知道有哪些對ELISA試劑盒測定結果有影響的原因嗎?

    發(fā)布時間: 2019-08-15  點擊次數(shù): 1304次

    ELISA試劑盒方法被廣泛應用于各種抗原和抗體測定,具有靈敏度高,操作簡單等優(yōu)點,但是在具體實驗過程中影響因素較多,并且要按照嚴格的說明要求,在檢驗中除正常反應外,有時常可見到一些錯誤結果(即假陽性或假陰性結果)

     

    影響ELISA測定錯誤結果的原因主要有:

     

    ①標本因素;

     

    ②試劑因素;

     

    ③操作因素。

     

    研域小編就標本因素對ELISA測定的影響做如下總結。

     

    一、類風濕因子

     

    人血清中IgM、IgG型類風濕因子(RF)可以與ELISA系統(tǒng)中的捕獲抗體及酶標記二抗的FC段直接結合,從而導致假陽性。

     

    解決辦法

     

    1.用F(ab)2替代完整的IgG;

     

    2.標本用聯(lián)有熱變性(63℃,10 min)IgG的固相吸附劑處理(將熱變性IgG加入到標本稀釋液中同樣有效);

     

    3.檢測抗原時,可以用2-巰基乙醇等加入到標本稀釋液中,使RF降解。

     

    二、補體

     

    ELISA系統(tǒng)中固相一抗和標記二抗過程中,抗體分子發(fā)生變構,其FC段的補體C1q分子結合位點被暴露出來,使C1q 可以將二者連接起來,從而造成假陽性。

     

    解決辦法

     

    1.用EDTA稀釋標本;

     

    2.用53℃,10 min或56℃,30 min加熱血清使C1q滅活。

     

    三、嗜異性抗體

     

    人類血清中含有能與嚙齒類動物(如鼠等)Ig(s) 結合的天然嗜異性抗體,可將ELISA系統(tǒng)中一抗和二抗連接起來,也能造成假陽性。

     

    解決辦法

    可在標本稀釋液中加入過量的動物Ig(s),但加入量不足或亞類不同時無效。

     

    四、嗜靶抗原的自身抗體

     

    抗甲狀腺球蛋白、抗胰島素等嗜靶抗原的自身抗體,有時能與靶抗原結合形成復合物,在ELISA方法中均可干擾抗原抗體測定結果。

     

    解決辦法

     

    測定前需用理化方法將其解離后再測定。

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