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研域課堂：原代細胞的培育辦法
發(fā)布時間： 2019-10-11 點擊次數(shù)： 1851次1、安排塊培育法
(1)依照前述辦法取材，將安排剪成或切成1mm3巨細的小塊，并參加少許培育基使安排濕潤。
(2)將小塊均勻涂布于瓶壁，每小塊距離0.2 cm~0.5cm，一般在25mL培育瓶(底面積為17.5cm2)可接種20～30小塊為宜,小塊放置后,輕輕翻轉(zhuǎn)培育瓶,使瓶底朝上,然后于瓶內(nèi)參加適量培育基蓋好瓶塞,將瓶歪斜放置在37℃溫箱內(nèi)。
(3)培育2~4小時，待小塊貼附后，將培育瓶緩慢翻轉(zhuǎn)平放，靜置培育，動作要輕，嚴(yán)禁搖擺和來回振動，以防因為激動而使小塊漂起而造成培育失敗，若安排塊不易貼壁可預(yù)先在瓶壁涂一薄層血清、胎汁或鼠尾膠原等。
2.消化培育法
該辦法是選用前述的消化渙散法，將阻礙細胞成長的細胞間質(zhì)（包含基質(zhì)、纖維等）去除，使細胞渙散形成細胞懸液，然后分瓶培育。
3.懸浮細胞培育法
關(guān)于懸浮成長的細胞，如白血病細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和**細胞無需消化，可選用低速離心分離，直接培育，或經(jīng)細胞分層液分離后接種培育。
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