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1. 準備好所有試驗額定所需物品,如試管、吸頭、移液器、離心機等;
2. 依據(jù)檢測標本數(shù)量確認所需試劑的量;
3. 按闡明書將所用試劑平衡至室溫,制造所需試劑;
4. 標本制備要規(guī)范,每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備,盡量分裝做備份。短期內無法試驗者,留意低溫保存。
試驗中為了確認信號和背景應將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗體(0.25-2μg/ml)在預試驗中進行彼此相抗的滴定。同時,應包括在適當范圍內的規(guī)范品的系列稀釋。按試劑闡明書慣例供給的范圍進行操作。
規(guī)范品的制造:對于每種細胞因子應仔細閱讀闡明書,留意每批的細節(jié)。在運用細胞因子前,瞬時離心試劑瓶,盡可能多地回收其間的細胞因子。依據(jù)每批闡明書中的細節(jié),將凍干的細胞因子復溶。
為了優(yōu)化靈敏度,主張過夜孵育規(guī)范品和標本。若運用過氧化物酶作為顯色體系,應禁止在洗液和稀釋液中加疊氮鈉,疊氮鈉可抑制過氧化物酶的活性。當測定混合液體中的抗原時,如血清,主張在標本稀釋液中加不相干的Ig。