發(fā)布時(shí)間: 2021-01-05 點(diǎn)擊次數(shù): 1460次
1.收到 細(xì)胞,di一時(shí)間要鏡檢:調(diào)查細(xì)胞形態(tài)是否正常,關(guān)于貼壁細(xì)胞則要留意看貼壁狀況是否很好,調(diào)查細(xì)胞密度,有疑議及時(shí)咨供給細(xì)胞的技術(shù)人員。由于運(yùn)送的時(shí)間或許溫度的改變,許多貼壁細(xì)胞在盛滿培育基的瓶子里成長(zhǎng)的狀況平和時(shí)會(huì)有點(diǎn)不一樣,主要是貼壁結(jié)實(shí)問(wèn)題。比如293T,平常貼壁就不是很牢,在裝滿的培育基瓶子里邊,會(huì)發(fā)生大片的脫落,細(xì)胞集合在一起,但是細(xì)胞成長(zhǎng)還是正常的,經(jīng)過(guò)離心搜集,加以胰酶的消化,從頭打散,又能夠正常的貼壁成長(zhǎng)。
2.當(dāng)經(jīng)過(guò)上一步的調(diào)查,細(xì)胞初步?jīng)]有任何問(wèn)題時(shí),進(jìn)行下一步操作。當(dāng)收到的細(xì)胞密達(dá)到80%左右時(shí),則處理如下:棄除瓶中大部分培育基,僅保留5到10mL培育所需的慣例培育基;或更換新鮮的培育基,置于培育箱中,隨后每天調(diào)查。細(xì)胞在低于正常成長(zhǎng)溫度狀況下,會(huì)調(diào)整為停止期,或許慢速成長(zhǎng)期,有必要康復(fù)37度的環(huán)境至少3個(gè)小時(shí)左右,才能從頭調(diào)整到接近對(duì)數(shù)成長(zhǎng)期的狀況,在對(duì)數(shù)成長(zhǎng)期進(jìn)行細(xì)胞的傳代會(huì)大大增加傳代的成功率,和細(xì)胞的存活率。
3.如果經(jīng)di一步調(diào)查發(fā)現(xiàn)細(xì)胞密度超越90%,而且 細(xì)胞 狀況很好時(shí),則復(fù)溫后2個(gè)小時(shí)需求立即傳代。傳代的比例應(yīng)依據(jù)不同的細(xì)胞而定。關(guān)于成長(zhǎng)比較快,狀況安穩(wěn),不易受外界影響的細(xì)胞能夠一次多傳幾瓶;關(guān)于成長(zhǎng)較慢,細(xì)胞比較薄,狀況容易動(dòng)搖的細(xì)胞類型,一次少傳些,保證每瓶細(xì)胞密度大些,便于安穩(wěn)成長(zhǎng)。至于一些比較生疏的細(xì)胞,di一次處理也能夠按照第二種狀況。