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很多人做ELISA實(shí)驗(yàn),覺(jué)得真簡(jiǎn)單,無(wú)非就是加樣,保溫,洗滌等操作步驟??墒菍?shí)驗(yàn)結(jié)果經(jīng)常不盡人意。今天小編就給大家總結(jié)一下ELISA實(shí)驗(yàn)洗滌要點(diǎn),掌握這些,實(shí)驗(yàn)So easy!
洗滌在 ELISA 過(guò)程中不是反應(yīng)聚,但卻是決定實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。洗滌的目的是洗去反應(yīng)液中沒(méi)有與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過(guò)程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
聚苯乙烯待塑料對(duì)蛋白質(zhì)的吸附作用是普遍性的。因此在 ELISA 測(cè)定的反應(yīng)過(guò)程中應(yīng)盡量避免非特異性吸附,而在洗滌時(shí)又應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來(lái)。
在標(biāo)本和結(jié)合物的稀釋液和洗滌液中加入聚山梨酯(吐溫,Tween)一類物質(zhì)即右達(dá)到此目的。聚山梨酯是聚氧乙烯去水山梨醇脂肪酸酯,為非離子型的表面張力物質(zhì),常作為助溶劑。
根據(jù)脂肪酸的種類而對(duì)聚山梨酯編號(hào),結(jié)合月桂酸的為聚山梨酯 20,在 ELISA 中為常用。它的洗滌效果好,并具有減少非特異性吸附和增強(qiáng)抗原抗體結(jié)合的作用。
洗滌如過(guò)沒(méi)清洗干凈,特別在后一次,如有酶結(jié)合物的非特異性吸附,將使空白值升高。另外,在間接法中如血清標(biāo)本內(nèi)的非特異性 IgG 吸附在固相上而未被洗凈,也將與酶標(biāo)抗體作用而產(chǎn)生干擾。
ELISA 板的洗滌一般可采用以下方法:
①吸干孔內(nèi)反應(yīng)液;
②將洗滌液注滿板孔;
③放置 2 min,略作搖動(dòng);
④吸干孔內(nèi)液,也可傾去液體后在吸水紙上拍干。洗滌的次數(shù)一般為 3~4 次,有時(shí)甚至需洗 5~6 次。