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犬利什曼原蟲抗體(Leishmania spp Ab)酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒
本試劑盒僅供研究使用。
犬利什曼原蟲抗體(Leishmania spp Ab)酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒
使用目的:
本試劑盒用于測定犬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中利什曼原蟲抗體(Leishmania spp Ab)表達(dá)。
犬利什曼原蟲抗體(Leishmania spp Ab)酶聯(lián)免疫分析ELISA試劑盒
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗原夾心法測定標(biāo)本中犬利什曼原蟲抗體(Leishmania spp Ab)表達(dá)。用純化的抗原包被微孔板,制成固相抗原,可與樣品中利什曼原蟲抗體(Leishmania spp Ab)相結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗原和其他成分后再與HRP標(biāo)記的抗原結(jié)合,形成抗原-抗體-酶標(biāo)抗原復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),與CUTOFF值相比較,從而判定標(biāo)本中犬利什曼原蟲抗體(Leishmania spp Ab)的存在與否。
試劑盒組成
1 30倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 6ml×1瓶
2 酶標(biāo)試劑 6ml×1瓶 8 陽性對照 0.5ml×1瓶
3 酶標(biāo)包被板 12孔×8條 9 陰性對照 0.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 6ml×1瓶 10 說明書 1份
5 顯色劑A液 6ml×1瓶 11 封板膜 2張
6 顯色劑B液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1個
標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
編號:將樣品對應(yīng)微孔按序編號,每板應(yīng)設(shè)陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)
加樣:分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,
溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
溫育:操作同3。
洗滌:操作同5。
顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.
終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍(lán)色立轉(zhuǎn))。
測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
操作程序總結(jié):
計算和結(jié)果判定:
試驗(yàn)有效性:陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10
臨界值(CUT OFF)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15
陰性判定:樣品OD值< 臨界值(CUT OFF)者為利什曼原蟲抗體(Leishmania spp Ab)陰性
陽性判定:樣品OD值≥ 臨界值(CUT OFF)者為利什曼原蟲抗體(Leishmania spp Ab)陽性
。
注意事項
1.操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行,本試劑不同批號組分不得混用。
2.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
3.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結(jié)果。
封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
5.底物請避光保存。
6.試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn),使用雙波長檢測時,參考波長為630nm
7.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。終止液為2M的硫酸,使用時必須注意安全。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:;2-8℃。
2.有效期:6個月
CB0054-50g Cerium (III) chloride, heptahydrate 氯化鈰七水 [18618-55-8] 50g
C2139-25g Cerium (III) fluoride 氯化鈰 [7758-88-5] 25g
CB0283-50g Cerium(III) nitrate, hexahydrate 硝酸鈰 [10294-41-4] 50g
C2231-100g Cerium(IV) oxide 氧化鈰 [1306-38-3] 100g
CB0051-50g Cerium(III) sulfate, octahydrate 硫酸鈰八水 [13454-94-9] 50g
C2656-25g Cerium(IV) sulfate tetrahydrate 硫酸鈰四水 [10294-42-5] 25g
C2694-5g Cesium bromide 溴化銫 [7787-69-1] 5g
C2777-5g Cesium carbonate 碳酸銫 [534-17-8] 5g
CDB0054-50g Cesium chloride 氯化銫 [7647-17-8] 50g
CDB0054-250g Cesium chloride 氯化銫 [7647-17-8] 250g