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1 大鼠ELISA試劑盒試劑的選擇
通常所使用的ELISA試劑盒或其它試劑,必須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準(zhǔn)、批檢合格、臨床評估質(zhì)量優(yōu)良,并且均在有效期內(nèi)使用。不同批號(hào)試劑組分不得混用,過期的試劑一律不得使用,首先提升實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。
2大鼠ELISA試劑盒 樣品的采集與保存
用于檢測的標(biāo)本應(yīng)保持新鮮,標(biāo)本的采集應(yīng)盡量避免溶血,因紅細(xì)胞破裂可釋放過氧化物酶活性物質(zhì),干擾結(jié)果,會(huì)出現(xiàn)假陽性;標(biāo)本如果受細(xì)菌污染,會(huì)因菌體中含有內(nèi)源性過氧化物酶而出現(xiàn)假陽性;混濁或有沉淀的血清樣品應(yīng)離心,待澄清后方可檢測,避免對結(jié)果造成影響。
用于HIV抗體檢測的血清或血漿樣品應(yīng)存放于-20 ℃以下,短期(1周內(nèi))進(jìn)行檢測的樣品可存放于2 ℃~8 ℃。融解時(shí)應(yīng)上下顛倒充分混勻,動(dòng)作要輕緩,避免產(chǎn)生氣泡。同時(shí)應(yīng)注意避免樣品反復(fù)凍融,否則會(huì)造成樣品抗體效價(jià)降低,影響其結(jié)果。
3 大鼠ELISA試劑盒加樣
加樣前應(yīng)注意將微孔板條從冷藏環(huán)境中取出放置室溫,待試劑平衡后方可使用,未用完者需放入有干燥劑的密封袋中保存。整個(gè)HIV抗體檢測必須符合《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》,嚴(yán)格防止交叉感染。操作時(shí)必須戴手套、穿工作衣,嚴(yán)格執(zhí)行消毒隔離制度。
加樣要用微量移液器(要求準(zhǔn)確性高并定期進(jìn)行校正),按規(guī)定的量加入孔內(nèi),避免加在孔壁的邊緣,垂直加樣,不要使吸頭碰到酶標(biāo)板孔上的已包被的抗原,加樣時(shí)盡量慢吸快放,同時(shí)注意不要濺出,避免產(chǎn)生氣泡。
每次加樣都要更換吸頭,做到一樣一吸頭,防止發(fā)生交叉污染,干吸頭預(yù)先在血清中抽吸3次,以便保證加樣量的準(zhǔn)確性。滴加試劑應(yīng)先將滴瓶搖勻并擠去*滴后再進(jìn)行滴加,以免產(chǎn)生氣泡。
4 溫育
抗原抗體反應(yīng)需要在一定的溫度下(zui適溫度為37 ℃),經(jīng)過一定的時(shí)間才能達(dá)到反應(yīng)的平衡點(diǎn)。溫育一般采用能使反應(yīng)液溫度迅速達(dá)到平衡的水育法,一種是放在水育箱的隔板上,另一種是放在溫箱的濕盒內(nèi),水要浸至板條的1/3處,不可將板條疊加放置,以保證各板的溫度平衡一致。
5 洗板
由于待檢血清中可能有HIV病毒的存在,采用ELISA法進(jìn)行檢測HIV抗體時(shí),盡量使用洗板機(jī)洗板,一方面可以確保檢測人員的安全,另一方面可以防止環(huán)境污染。洗板在ELISA檢測中是一個(gè)非常重要的環(huán)節(jié),洗板的合格與否直接影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此,洗板時(shí)一定要先放好,洗滌開始時(shí)注意觀察洗板機(jī)上的每個(gè)吸液針是否都一致地插入孔底,并且將孔內(nèi)液體全部吸干,按說明書要求設(shè)置浸泡的時(shí)間以及洗滌的次數(shù)。洗滌結(jié)束后進(jìn)行拍板,同時(shí)要用蒸餾水沖洗管道,避免由于洗液的結(jié)晶而造成管道堵塞。同時(shí)要注意各種ELISA試劑盒的洗滌液不可混用。