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在ELISA檢測系統(tǒng)的關(guān)鍵要素中,包被原的性質(zhì)很重要,蛋白濃度,是否降解,這關(guān)系到你做出的抗體可不可以被其識別,所以保留抗原很重要,ELISA試劑盒我做重組蛋白時,一定要在冰浴下緩慢融化就是這個道理。封鎖就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些曠地空閑,從而排斥ELISA后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。但有時因為試驗的需要,包被原的特殊性也可能采用中性的緩沖溶液來包。
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。該法適于測定細胞培養(yǎng)上清、血清、血漿及組織液中的樣本,干擾小可以測到每毫升納克水平的細胞因子(或受體)的水平。在這種測定方法中有3種必要的試劑:①固相的抗原或抗體;②酶標記的抗原或抗體;③酶作用的底物。
根據(jù)ELISA試劑盒試劑的來源和標本的性狀以及檢測的具備條件,可設(shè)計出各種不同類型的檢測方法。
(1) 雙抗體夾心法;
(2) 雙位點一步法;
(3) 間接法測抗體;
(4) 競爭法;
(5) 捕獲法測IgM抗體;
(6) 應(yīng)用親和素和生物素。
試劑盒普遍用作非放射性同位素的成鍵化驗。在這種方法中,通常標準配體是固定的,通過加入溶液相受體或蛋白質(zhì)來使之成鍵。通過加入與受體特異性反應(yīng)的抗體來定量成鍵的受體,ELISA試劑盒而且zui初抗體的量以加入第二種能顯色的抗體測量。第二種抗體能識別抗體的末端,在其末端的堿性磷酸酯或過氧化物酶等與酶發(fā)生反應(yīng),從而使溶液顯色。
操作注意:
(1) 試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20 分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,這屬于正?,F(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。
(2) 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。
(3) 嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。
(4) 所有液體組分使用前充分搖勻。