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本產(chǎn)品僅供研究使用
【試劑盒名稱】
大鼠膽固醇7α羥化酶(CYP7α1)定量檢測試劑盒(ELISA)
【試劑盒用途】
定量檢測大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中膽固醇7α羥化酶(CYP7α1)的含量。
【檢測原理】
本試劑盒采用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)。將標準品、待測樣本加入到預先包被大鼠膽固醇7α羥化酶(CYP7α1)單克隆抗體透明酶標包被板中,溫育足夠時間后,洗滌除去未結(jié)合的成分,再加入酶標工作液,溫育足夠時間后,洗滌除去未結(jié)合的成分。依次加入底物A、B,底物(TMB)在辣根過氧化物酶(HRP)催化下轉(zhuǎn)化為藍色產(chǎn)物,在酸的作用下變成,顏色的深淺與樣品中大鼠膽固醇7α羥化酶(CYP7α1)濃度呈正相關(guān),450nm波長下測定OD值,根據(jù)標準品和樣品的OD值,計算樣本中大鼠膽固醇7α羥化酶(CYP7α1)含量。
【試劑盒組成】
1
酶標包被板
12孔×8條
7
顯色劑A液
6mL
2
標準品
0.3mL×6管
8
顯色劑B液
6mL
3
20倍濃縮洗滌液
25mL
9
終止液
6mL
4
樣本稀釋液
6mL
10
說明書
1份
5
特殊稀釋液
6mL
11
封板膜
2張
6
酶標試劑
6mL
12
密封袋
1個
備注:標準品(1號→6號)濃度依次為:24、12、6、3、1.5、0.75 U/L.
【需要而未提供的試劑和器材】
1、37℃恒溫箱
2、標準規(guī)格酶標儀
3、精密移液器及一次性吸頭
4、蒸餾水
5、一次性試管
6、吸水紙
【操作步驟】
1、準備:從冰箱取出試劑盒,室溫復溫平衡30分鐘。
2、配液:用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、加標準品和待測樣本:取足夠數(shù)量的酶標包被板,固定于框架上,分別設置標準品孔、待測樣本孔和空白對照孔,記錄各孔位置,在標準品孔中加入標準品50μL;待測樣本孔中先加入待測樣本10μL,再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍);空白對照孔不加。
4、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。
6、加酶標工作液:每孔加入酶標工作液50μL,空白對照孔不加。
7、溫育:37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
8、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。
9、顯色:每孔先加入顯色劑A 液50μL,再加入顯色劑B液 50μL,平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s),37℃避光顯色15min。
10、終止:取出酶標板,每孔加終止液50μL,終止反應(顏色由藍色立轉(zhuǎn))。
11、測定:以空白孔調(diào)零,在終止后15分鐘內(nèi),用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。
12、計算:根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值,計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣本的OD值,在回歸方程上計算出對應的樣品濃度,也可以使用各種應用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。
【樣本要求】
1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3),因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。
2、標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能立即試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
3、樣本應充分離心,不得有溶血及顆粒。
【注意事項】
1、實驗嚴格按照說明書的操作進行,實驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。
2、酶標包被板開封后如未用完,應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,以減小實驗誤差。
4、牢記樣本已經(jīng)稀釋5倍,計算結(jié)果乘以5才是樣本實際濃度。
5、本試劑盒定量范圍為0.75-24U/L,超過此范圍,為標準曲線延伸計算所得,不做為準確定量結(jié)果,請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結(jié)果(0.75-24U/L范圍內(nèi)),乘以總稀釋倍數(shù)即為樣本zui終濃度。
6、若顯色過淺,可適當延長底物溫育時間。
7、為避免交叉污染,標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭;酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微孔;不得重復使用封板膜。
8、試劑盒保質(zhì)期內(nèi)使用,不同批號的試劑不得混用。
9、底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。
【操作程序總結(jié)】
準備試劑,樣品和標準品
加入準備好的樣品和標準品,37℃反應30分鐘
洗板4次,加入酶標試劑,37℃反應30分鐘
洗板4次,加入顯色液A、B,37℃顯色15分鐘
加入終止液
15分鐘之內(nèi)讀OD值
計算
【檢測范圍】
0.75 U/L - 24 U/L
【規(guī)格】
96人份/盒
【貯藏】
2-8℃,避光防潮保存。
【有效期】
6個月