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黃曲霉毒素總殘檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品時(shí)間:2016-11-07
黃曲霉毒素總殘檢測(cè)試劑盒將進(jìn)一步加強(qiáng)人才培養(yǎng)、產(chǎn)品創(chuàng)新,持續(xù)不斷地提升企業(yè)核心竟?fàn)幜?,?shí)現(xiàn)具有高科技產(chǎn)業(yè)體系、知識(shí)化創(chuàng)業(yè)團(tuán)隊(duì)的化大集團(tuán)企業(yè),更好、更快捷、更*的服務(wù)于生命科學(xué)領(lǐng)域,迎接新一輪世界經(jīng)濟(jì)一體化所帶來(lái)的機(jī)遇與挑戰(zhàn)。

本產(chǎn)品僅用于科研,不用于臨床

黃曲霉毒素總殘檢測(cè)試劑盒使用說(shuō)明書(shū)(酶聯(lián)免疫法)

 
1 黃曲霉毒素總殘檢測(cè)試劑盒原理及用途
黃曲霉毒素是由黃曲霉菌屬的黃曲霉和寄生曲霉等產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物,主要污染玉米、花生、堅(jiān)果等。黃曲霉毒素以 AFB1、AFB2、AFG1 和 AFG2 這四種毒素為主,黃曲霉毒素總量一般是指這四種毒素的總量。它們是 I 類致癌物,被證明對(duì)人和動(dòng)物的肝臟、腎臟等組織和器官具有很大的危害,是一類毒性很強(qiáng)的致癌物質(zhì)。
本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法檢測(cè)谷物、花生、飼料等樣品中的黃曲霉毒素,試劑盒由預(yù)包被偶聯(lián)抗原的酶標(biāo)板、辣根酶標(biāo)記物、抗體、標(biāo)準(zhǔn)品及其他配套試劑組成。檢測(cè)時(shí),加入標(biāo)準(zhǔn)品或樣品溶液,樣本中的黃曲霉毒素和酶標(biāo)板上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗黃曲霉毒素抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含黃曲霉毒素含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣本中黃曲霉毒素的殘留量。
2 技術(shù)指標(biāo)
2.1 試劑盒靈敏度:0.02ppb(ng/ml)
2.2 反應(yīng)模式:25℃,30min~15min
2.3 檢測(cè)下限:
谷物……………………………………0.1ppb
配合飼料………………………………0.2ppb
食用油、花生…………………………0.2ppb
醬類、麥類等飼料……………………0.2ppb
啤酒……………………………………0.2ppb
葡萄酒、醬油、醋……………………0.1ppb
2.4 交叉反應(yīng)率:
黃曲霉毒素B1…………………………100%
黃曲霉毒素B2…………………………75%
黃曲霉毒素G1…………………………100%
黃曲霉毒素G2…………………………97%
黃曲霉毒素M1…………………………30%
 2.5 樣本回收率:
谷物及配合飼料……………………85%±15%
花生…………………………………82±15%
食用油………………………………85±15%
醬類、麥類等飼料………………83±15%
啤酒………………………………84±15%
葡萄酒、醬油、醋………………87±15%
3 試劑盒組成
酶標(biāo)板……………………………96孔
標(biāo)準(zhǔn)液(黑蓋):各1ml
0ppb、0.02ppb、0.04ppb、0.08ppb、0.16ppb、0.32ppb
高標(biāo)準(zhǔn)液(黑蓋):100ppb…………1ml
酶標(biāo)記物(紅蓋)…………………5.5ml
抗體工作液(藍(lán)蓋)………………5.5ml
底物液A(白蓋)……………………6ml
底物液B(黑蓋)……………………6ml
終止液(黃蓋)………………………6ml
20X濃縮洗滌液(白蓋)……………40ml
說(shuō)明書(shū)………………………………1份
4 需要的器材和試劑
4.1 儀器:酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、氮?dú)獯蹈裳b置、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)
4.2 微量移液器:?jiǎn)蔚?0µl-200µl,100µl-1000µl、多道300µl
4.3 試劑:甲醇、正己烷、二氯甲烷 
5 樣本前處理
5.1 樣本處理前須知:
實(shí)驗(yàn)器具必須潔凈并使用一次性吸頭,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
5.2 配液:
配液1:樣本提取液
    70%甲醇,即V甲醇:V去離子水=7:3。
5.3 樣本前處理步驟:
5.3.1 谷物處理方法 
1)稱取2g粉碎樣品于50ml離心管中,加5ml樣品提取液,振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;
2)取0.5ml上清,加入0.5ml去離子水,混勻;
3)取50μl進(jìn)行分析。
    樣本稀釋倍數(shù):5    檢測(cè)下限:0.1ppb
5.3.2 配合飼料處理方法 
1)稱取2g粉碎樣品于50ml離心管中,加10ml樣品提取液,振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;
2)取0.5ml上清,加入0.5ml去離子水,混勻;
3)取50μl進(jìn)行分析。
    樣本稀釋倍數(shù):10    檢測(cè)下限:0.2ppb
5.3.3 食用油、花生、高油脂的飼料處理方法
1)稱取2g粉碎樣品于50ml離心管中,加8ml正己烷和10ml樣品提取液,振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;
2)去除上層液體,取0.5ml下層液體加入0.5ml去離子水,混勻;
3)取50μl進(jìn)行分析。
    樣本稀釋倍數(shù):10    檢測(cè)下限:0.2ppb
5.3.4 醬類、麥類、餅干、糕點(diǎn)等食品或調(diào)料,以及飼料濃縮料等飼料處理方法
1)稱取2g粉碎樣品于50ml離心管中,加10ml樣品提取液,振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;
2)取2ml上清,加入4ml(或二氯甲烷),振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;
3)轉(zhuǎn)移上層液體到另一容器中,下層液留置備用,向上層液中再加入4ml(或二氯甲烷),充分振蕩混5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;
4)去除上層液體,合并兩次的下層液體并充分混勻;
5)取合并后的下層液體2ml于50-60℃氮?dú)庀麓蹈桑?br />6)加入0.5ml樣品提取液充分溶解干燥物,再加入0.5ml去離子水混勻;
7)取50μl進(jìn)行分析。
    樣本稀釋倍數(shù):10    檢測(cè)下限:0.2ppb
5.3.5 啤酒處理方法
1)將啤酒充分?jǐn)嚢瑁ㄈコ鼵O2),取2ml啤酒樣品,加入1ml蒸餾水,再加入7ml甲醇,振蕩5分鐘;
2)取混勻后的樣品液0.5ml加入0.5ml去離子水,混勻;
3)取50μl進(jìn)行分析。
    樣本稀釋倍數(shù):10    檢測(cè)下限:0.2ppb
5.3.6 葡萄酒、醬油、醋處理方法
1)取2ml樣品,加入2ml蒸餾水,再加入10ml(或二氯甲烷),振蕩5分鐘,室溫4000轉(zhuǎn)/分離心10分鐘;
2)取下層液體1ml于50-60℃氮?dú)庀麓蹈桑?br />3)加入0.5ml樣品提取液充分溶解干燥物,再加入0.5ml去離子水,混勻;
5)取50μl進(jìn)行分析。
樣本稀釋倍數(shù):5    檢測(cè)下限:0.1ppb
6 酶聯(lián)免疫試驗(yàn)步驟
    將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出,置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時(shí)可能會(huì)有結(jié)晶需恢復(fù)到室溫以充分溶解,每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架,將不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。
實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前,用去離子水將20×濃縮洗滌液按20倍稀釋成工作洗滌液。
6.1 編    號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。
6.2 加樣反應(yīng):加標(biāo)準(zhǔn)品或樣本50µl/孔到各自的微孔中,然后加酶標(biāo)記物50µl/孔,再加入50µl/孔的抗體工作液,用蓋板膜封板,輕輕振蕩5秒混勻,25℃反應(yīng)30分鐘。
6.3 洗    滌:小心揭開(kāi)蓋板膜,將孔內(nèi)液體甩干,用工作洗滌液250µl/孔充分洗滌5次,每次間隔30秒,用吸水紙拍干(拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
6.4 顯    色:每孔加入底物液A 50µl,再加底物液B 50µl,輕輕振蕩5秒混勻,25℃避光顯色15分鐘。
6.5 終    止:每孔加入終止液50µl,輕輕振蕩混勻,終止反應(yīng)。
6.6 測(cè)吸光值:用酶標(biāo)儀于450nm處測(cè)定每孔吸光度值(建議用雙波長(zhǎng)450/630nm)。測(cè)定應(yīng)在終止反應(yīng)后10分鐘內(nèi)完成。
7 結(jié)果分析
7.1 百分吸光率的計(jì)算
    標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)液或樣本的百分吸光度值的平均值(雙孔)除以*個(gè)標(biāo)準(zhǔn)液(0ppb)的吸光度值,再乘以100%,即
 百分吸光度值(%)=
A
×100%
A0
A—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
A0—0ppb標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
7.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算
    以標(biāo)準(zhǔn)液百分吸光率為縱坐標(biāo),對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)液濃度(ppb)的對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)液的半對(duì)數(shù)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中待測(cè)物的實(shí)際濃度。
    若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。(索?。?br />8 注意事項(xiàng)
8.1 室溫低于25℃或試劑及樣本沒(méi)有回到室溫(25℃)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
8.2 在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
8.3 混合要均勻,洗板要*,在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的*性。
8.4 在所有孵育過(guò)程中,用蓋板膜封住微孔板,避免光線照射。
8.5 不要使用過(guò)了有效期的試劑盒,不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。
8.6 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位(A450nm< 0.5 )時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。
8.7 反應(yīng)終止液有腐蝕性,避免接觸皮膚。
9 貯藏及保存期
儲(chǔ)藏條件:試劑盒于2-8℃保存,避免冷凍。
保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見(jiàn)包裝盒。

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